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西安百螢生物科技有限公司 主營:百螢生物圍繞熒光發光、熒光標記、熒光探針等技術進行產品研發,公司產品廣泛用于核酸蛋白定量、細胞凋亡研究、細胞信號通路研究、細胞及線粒體膜電位檢測、細胞器染色、活體示蹤、抗體標記等科研領域。
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產品詳情

Screen?Quest?Fluo-8鈣檢測試劑盒適合于難檢測細胞系

  • 如果您對該產品感興趣的話,可以
  • 產品名稱:Screen?Quest?Fluo-8鈣檢測試劑盒適合于難檢測細胞系
  • 產品型號:36308
  • 產品展商:AAT Bioquest
  • 產品文檔:無相關文檔
簡單介紹

Screen?Quest?Fluo-8鈣檢測試劑盒適合于難檢測細胞系 ,Screen Quest檢測試劑盒是一類用于檢測各種細胞離子通道以及電位等系列工具,包括膜電位、鈣離子流、多**抗性、氯離子以及氯離子通道等方面的指標。Screen?Quest?Fluo-8鈣檢測試劑盒適合于難檢測細胞系 ,每種檢測方案均能提供不同的檢測方案。

產品描述

簡要概述

Screen Quest Fluo-8鈣檢測試劑盒是美國AAT Bioquest生產的鈣檢測試劑盒,鈣通量測定是用于篩選G蛋白偶聯受體(GPCR)的**發現中的優選方法。 Screen Quest Fluo-8 NW鈣測定試劑盒提供均勻的熒光測定,用于檢測細胞內鈣動員。表達感興趣的GPCR的細胞通過鈣預先加載我們專有的Fluo-8 NW,其可以穿過細胞膜。 Fluo-8 NW是可用于HTS篩選的*亮鈣指示劑。一旦進入細胞內,Fluo-8 NW的親脂性阻斷基團被非特異性細胞酯酶切割,產生帶負電荷的熒光染料,其停留在細胞內,并且在與鈣結合時其熒光大大增強。當用篩選化合物刺激細胞時,該受體表明細胞內鈣的釋放,這極大地增加了Fluo-8 NW的熒光。其長波長,高靈敏度和100-250倍熒光增加的特性(當它與鈣形成復合物時)使Fluo-8 NW成為測量細胞鈣的理想指標。這個Screen Quest Fluo-8 NW鈣測定試劑盒提供了一種優化的檢測方法,用于監測G蛋白偶聯受體(GPCR)和鈣通道。該測定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式進行,并且易于適應自動化。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商,為您提供*上等的Screen Quest Fluo-8鈣檢測試劑盒。 

 

適用儀器


熒光酶標儀  
激發: 490nm
發射: 525nm
cutoff: 510nm
推薦孔板: 黑色
儀器使用: 底部讀取模式/可編程液體處理
其他可用儀器:
FDSS, FLIPR, ViewLux, NOVOStar, ArrayScan, FlexStation, IN Cell Analyzer


產品說明書

樣品實驗方案

簡要概述

1.準備細胞
2.去除生長培養基
3.添加Fluo-8 NW染料工作溶液
4.在室溫下孵育1小時
5.監測Ex / Em = 490 / 525nm處的熒光強度

 

溶液配制

1.儲存溶液配制

除非另有說明,否則所有未使用的儲備溶液應分成一次性等分試樣,并在制備后儲存在-20°C。 避免反復凍融循環。
1.1 Fluo-8 NW配制:
對于Cat No.36307,將10μLDMSO加入Fluo-8 NW(組分A)中,并充分混合。
對于Cat No.36308和36309,將100μLDMSO加入Fluo-8 NW(組分A)中,并充分混合。 注意:10μLFluo-8 NW原液足以容納1個平板。

1.2分析緩沖液儲備液(1X):
對于Cat No.36307和36308,將9mL HHBS(組分C)加入10X Pluronic F127 Plus(1mL,組分B)中并充分混合。
對于Cat No.36309,將整瓶10XPluronic®F127Plus(10 mL,組分B)加入90 mL HHBS緩沖液(不包括在試劑盒中)中并充分混合。 注意:對于一個平板,10 mL的1X分析緩沖液就足夠了。

 

2.工作溶液配制

將10μLFluo-8 NW DMSO儲備溶液加入10mL 1X測定緩沖液中并充分混合。 該工作溶液在室溫下穩定至少2小時。

 

操作步驟

1.有關細胞樣品制備的指南,請點擊查看。

2.從細胞板上除去生長培養基。注意:重要的是去除生長培養基,以*大限度地減少背景熒光和化合物對血清或培養基的干擾。注意:或者,在含有0.5%至1%FBS的生長培養基中培養細胞,以避免培養基去除步驟。在這種情況下,需要在HHBS緩沖液中加入2X染料。 [我們為那些在生長培養基中使用0.5%至1%FBS以避免培養基去除步驟的人提供2個獨立的無洗滌鈣測定試劑盒(目錄號36315和目錄號36316)。

3.將100μL/孔(96孔板)或25μL/孔(384孔板)的Fluo-8NW染料工作溶液加入到細胞板中。

4.將染料加載板在細胞培養箱中孵育30分鐘,然后在室溫下將板孵育另外30分鐘。注意:如果測定需要37°C,立即進行實驗,無需進一步室溫孵育。注意:如果細胞在室溫下運行時間較長,可在室溫下孵育細胞培養板1-2小時(建議培養時間不超過2小時。)

5.用HHBS或所需緩沖液制備復合板。

6.通過監測Ex / Em = 490 / 525nm處的熒光強度來進行鈣通量測定。注意:在實驗之前運行信號測試很重要。不同的儀器有自己的強度范圍。將信號測試強度調整到*大強度計數的10%至15%的水平。例如,FLIPR-384的*大熒光強度計數為65,000,因此應調整儀器設置以使其信號測試強度在7,000到10,000左右。

 

數據分析

        從空白標準孔獲得的讀數(RFU(Max-Min))用作陰性對照。 從其他標準的讀數中減去該值,以獲得基線校正值。 然后,繪制標準讀數以獲得標準曲線和方程。 該等式可用于計算卡巴膽堿劑量樣品。 

圖1.使用Screen Quest Fluo-8 NW Assay Kit和Fluo-4 NW Assay Kit在HEK-293細胞中測量Carbachol劑量反應。 將HEK-293細胞以40,000個細胞/100μL/孔接種在Costar黑壁/透明底96孔板中過夜。 除去生長培養基,使用Screen Quest Fluo 8-NW鈣測定試劑盒或Fluo-4 NW試劑盒(根據制造商的說明書)將細胞與100μL染料上樣溶液一起在室溫下孵育1小時 溫度。 通過NOVOstar(BMG Labtech)添加卡巴膽堿(25μL/孔)以達到*終指示的濃度。 Fluo8 NW的EC50約為1.2μM。

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