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西安百螢生物科技有限公司 主營:百螢生物圍繞熒光發光、熒光標記、熒光探針等技術進行產品研發,公司產品廣泛用于核酸蛋白定量、細胞凋亡研究、細胞信號通路研究、細胞及線粒體膜電位檢測、細胞器染色、活體示蹤、抗體標記等科研領域。
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產品詳情

Cell?Counting?Kit-8/CCK-8試劑盒/WST-8細胞增殖與活性檢測

  • 如果您對該產品感興趣的話,可以
  • 產品名稱:Cell?Counting?Kit-8/CCK-8試劑盒/WST-8細胞增殖與活性檢測
  • 產品型號:35002
  • 產品展商:Biolite
  • 產品文檔:無相關文檔
簡單介紹

Cell?Counting?Kit-8/CCK-8試劑盒/WST-8細胞增殖與活性檢測,是一種基于SST-8的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。Cell?Counting?Kit-8/CCK-8試劑盒/WST-8細胞增殖與活性檢測很受歡迎。

產品描述

Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 細胞增殖與活性檢測試劑盒
貨號                       35002                    存儲條件                建議在低于-15℃溫度下冷凍保存             
規格 10ml 價格 1140
Ex (nm)
Em (nm)
分子量 600.47 溶劑 Water
產品詳細介紹

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簡要概述

        Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 細胞增殖與活性檢測試劑盒是百螢生物生產的一種基于 SST-8 的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。其主要成分為水溶性四唑鹽 SST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽),SST-8 是一種類似于 MTT 的化合物,在電子耦合試劑存在的情況下,可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成橙黃色的水溶性的甲臜(formazan,參考圖1)。SST-8 被細胞內脫氫酶生物還原后生成的甲臜能夠直接溶解在培養基中。細胞增殖越多越快,則顏色越深;細胞毒性越大,則顏色越淺。對于同樣的細胞,顏色的深淺和細胞數目呈線性關系。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商,為您提供*上等的熒光探針。 

  • CCK-8 細胞增殖與活性檢測的專家
  • CCK-8 常見問題詳解


產品特點

        本試劑盒提供了一種靈敏度高,操作簡便,使用安全的細胞增殖與活性檢測方法。與傳統的 MTT 實驗相比具有明顯的優勢:


1.MTT實驗生成的甲臜不是水溶性的,需要使用 DMSO 等有機溶劑溶解;而本方法產生的甲臜是水溶性的,不僅省去了溶解步驟,更因此而減少了該操作步驟帶來的誤差。

2.與 MTT 方法相比,本方法線性范圍更寬,靈敏度更高。

3.本方法對細胞無毒性,可以多次測定,選取*佳測定時間。

4.本方法所用試劑在培養基中比 MTT 更加穩定,實驗結果重復性好。

5.MTT 具有毒性,同時其生成的甲臜需要有機溶劑溶解,會對操作人員身體造成危害。本試劑無毒,使用中無需有機溶劑,操作更加安全。

6.本試劑盒在 4°C 避光可長期保存,使用無需配制,即開即用。


        本試劑盒可以用于生物活性因子的活性檢測,抗腫瘤**的篩選,細胞增殖的測定,細胞毒性檢測以及藥敏等與細胞活性和增殖相關的實驗。本試劑盒使用方便,試劑盒包含一管已經配制好的含有 SST-8 的 CCK-8 溶液,即開即用,無需其他準備步驟。檢測過程也無需采用額外的步驟去溶解甲臜,可直接使用 96 孔板或者 384 孔板在酶標儀上檢測,適合大規模,高通量的樣品檢測。


產品說明書

實驗方案

1.在96 孔板中配置100μL的細胞懸液(通常細胞增殖實驗每孔加入100μL2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100μL5000個細胞。具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等因素決定)。按照實驗需要,進行培養(在37°C,5%CO2的條件下)預培養24 小時。

2.向培養板加入1-10μL 不同濃度的待測**刺激。

3.將培養板在培養箱孵育一段適當的時間(例如:6、12、24 或48 小時)。

4.每孔加入10μLCCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響OD 值的讀數)。如果起始的培養體積為200μL,則需加入20μLCCK-8溶液,其它情況以此類推??梢杂眉恿讼鄳考毎囵B液和CCK-8溶液但沒有加入細胞的孔作為空白對照。如果擔心所使用的**會干擾檢測,需設置加了相應量細胞培養液、**和CCK-8溶液但沒有加入細胞的孔作為空白對照。

5.在細胞培養箱內繼續孵育1-4小時,對于大多數情況孵育1小時就可以了。時間的長短根據細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定,初次實驗時可以在0.5、1、2和4小時后分別用酶標儀檢測,然后選取吸光度范圍比較適宜的一個時間點用于后續實驗。

6.用酶標儀測定在450nm處的吸光度,如無450nm濾光片,可以使用420-480nm的濾光片??梢允褂么笥?00nm的波長,例如650nm,作為參考波長進行雙波長測定。

7.如果暫時不測定OD 值,打算以后測定的話,可以向每孔中加入10 μL 0.1M 的HCL 溶液或者1% w/v SDS 溶液,并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在24小時內吸光度不會發生變化。

注意:如果待測物質有氧化性或還原性的話,可在加CCK 之前更換新鮮培養基(除去培養基,并用培養基洗滌細胞兩次,然后加入新的培養基),去掉**影響。當然**影響比較小的情況下,可以不更換培養基,直接扣除培養基中加入**后的空白吸收即可。


注意事項:

1.由于使用96孔板進行檢測,如果細胞培養時間較長,一定要注意蒸發的問題。一方面,由于96孔板周圍一圈*容易蒸發,可以采取棄用周圍一圈的辦法,改加PBS,水或培養液;另一方面,可以把96孔板置于靠近培養箱內水源的地方,以緩解蒸發。

2.CCK-8檢測細胞活性的原理是通過檢測活細胞脫氫酶催化的反應。任何待測體系中存在還原劑,例如一些抗氧化劑會干擾檢測,需設法去除。

3.建議先做幾個孔摸索接種細胞的數量和加入CCK-8試劑后的培養時間。

4.建議采用多通道移液器,可以減少平行孔間的差異。加入CCK 試劑時,建議斜貼著培養板壁加,不要插到培養基液面下加樣,容易產生氣泡,會干擾OD 值讀數。

5.當使用標準96 孔板時,貼壁細胞的*小接種量至少為1,000 個/孔 (100 μL培養基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低,因此推薦接種量不低于2,500 個/孔 (100 μL培養基),且培養時間長一些。如果要使用24 孔板或6 孔板實驗,請先計算每孔相應的接種量,并按照每孔培養基總體積的10%加入CCK-8溶液。

6.加入CCK -8溶液時,如果細胞培養時間較長,培養基顏色已變化或pH值變化。建議換用新鮮的培養基。

7.如果沒有450nm 的濾光片,可以使用吸光度在430-490 nm 之間的濾光片,但是450nm 濾光片的檢測靈敏度*高。

8.酚紅和血清對本試劑盒的測定無明顯影響。培養基中酚紅的吸光度可以在計算時,通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不會對檢測造成影響。

9.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。


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